生活污水與工業廢水含有大量有機物，這些有機物在水體中分解時要消耗大量溶解氧，從而破壞水體中氧的平衡，使水質惡化。

生化需氧量是屬于利用水中有機物在一定條件下所消耗的氧，用來表示水體中有機物的含量的一個重要指標。

生化需氧量的經典測定方法，是稀釋接種法。

稀釋接種法：

1、方法原理

生化需氧量是指在一定條件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物質、特別是有機物所進行的生物化學過程消耗溶解氧的量。

于恒溫培養箱內在20℃±1℃培養5天，分別測定樣品培養前后的溶解氧，二者之差即為BOD5值，以氧的mg/L表示。

本方法適用于測定BOD5范圍：2mg/L＜C BOD5＜6000mg/L，當＞6000時，會因稀釋帶來誤差。

儀器：

（1）恒溫培養箱

（2）5—20L細口玻璃瓶

（3）1000—2000ml量筒

（4）玻璃棒：50ml，棒的底端固定一個10號的帶有幾個小孔的橡膠塞。

（5）溶解氧瓶（碘量瓶）：250—300ml

試劑：

（1）磷酸鹽緩沖溶液

將8.5g磷酸二氫鉀（KH2PO4），21.75g磷酸氫二鉀（K2HPO4），33.4g七水合磷酸氫二鈉（Na2HPO4·7H2O），和1.7g氯化銨（NH4Cl）溶于水中，稀至1000ml。此溶液PH值為7.2。

（2）硫酸鎂溶液

將22.5g七水合硫酸鎂（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀至1000ml。

（3）氯化鈣溶液

將27.5g無水氯化鈣溶于水中，稀至1000ml。

（4）氯化鐵溶液

將0.25g六水合氯化鐵（FeCl3·6H2O）溶于水，稀至1000ml。

（5）鹽酸溶液（0.5mol/L）

將40ml濃鹽酸溶于水， 稀至1000ml。

（6）氫氧化鈉溶液（0.5mol/L）

將20g氫氧化鈉溶于水，稀至1000ml。

（7）葡萄糖—谷氨酸標準溶液

將葡萄糖和谷氨酸在103干燥1小時后，各稱取150mg溶于水中，移入1000ml容量瓶中稀至標線，臨用前配制。

（8）稀釋水

在5—20L玻璃瓶中裝入一定量的水，控制水溫在20℃左右，用曝氣機曝氣2-8小時，使稀釋水中的溶解氧接近飽和。瓶口蓋以兩層紗布，置于20℃培養箱內放置數小時，使水中溶解氧含量達到8mg/L左右。臨用前向每升水中加入氯化鈣、硫酸鎂、氯化鐵、磷酸緩沖液各1ml，混勻。

（9）接種液可選用以下幾種：

①一般生活用水，放置一晝夜，取上清液。

②表層土壤水，取100g花園或植物生長土壤，加1升水，靜置10分鐘，取上清液。

③污水廠出水

④含有城市污水的河水或湖水

（10）接種稀釋水

每升稀釋水中接種的加入量：生活污水1-10ml；表層土壤水20-30ml；河水或湖水10-100ml。

接種稀釋水pH值為7.2，配制后應立即使用。

2、水樣的測定

（1）不經稀釋的水樣的測定

①將混勻水樣轉移入兩個溶解氧瓶中（轉移中不要出現氣泡），溢出少許，加塞。瓶內不應留氣泡。

②其中一瓶隨即測定溶解氧，另一瓶口水封后放入培養箱，在20±1℃下培養5天。

③5天后，測定溶解氧。

④計算：

-水樣在培養前的溶解氧濃度

-水樣在培養后的溶解氧濃度

經稀釋水樣的測定：

一般稀釋法

①按選定的稀釋比例，在1000ml量筒內引入部分稀釋水；

②加入需要量的混勻水樣，再引入稀釋水（或接種稀釋水）至800ml；

③用帶膠板的玻璃棒上下攪勻。攪拌時膠板不要露出水面，防止產生氣泡；

④將水樣裝入兩個溶解氧瓶內，測定當天溶解氧和培養5天后的溶解氧。

⑤稀釋水同樣培養作空白實驗，測定5天前后的溶解氧。

注意事項：

（1）水樣pH值應在6.5-7.5范圍內，若超出可用鹽酸或氫氧化鈉調節pH近于7。

（2）水樣在采集和保存及操作過程中不要出現氣泡

（3）水樣稀釋倍數超過100時，要預先在容量瓶中用蒸餾水稀釋，再取適量進行稀釋培養。

（4）檢查稀釋水和接種液的質量和化驗人員的水平，可將20ml葡萄糖-谷氨酸標液用稀釋水稀至1000ml，按BOD的步驟操作，測得的值應在180-230mg/L之間，否則，應找出原因所在。

（5）在培養過程中注意及時添加封口水。